DNA与RNA实验判别要领的选择，，
，主要取决于样品是否纯净、可用量几多，，
，以及实验只需要快速定性，，
，照旧要确认样品中是否同时含有DNA和RNA。。。。常用思绪包括特征显色、核酸酶处置惩罚、碱水解和电泳比照。。。。单看紫外吸收值或电泳条带形态，，
，通常只能说明保存核酸，，
，不可自力证实它是DNA照旧RNA。。。。

先看DNA与RNA能被区分的实验依据

DNA和RNA都由核苷酸组成，，
，但糖基结构差别：DNA含有脱氧核糖，，
，RNA含有核糖，，
，RNA比DNA多一个2'-羟基。。。。这个差别带来三类可使用的效果：

• 化学反应差别：脱氧核糖可加入二苯胺反应，，
  ，核糖可到园地衣酚（orcinol）反应。。。。
• 酶切敏感性差别：DNase主要降解DNA，，
  ，RNase主要降解RNA。。。。
• 稳固性差别：RNA在碱性条件下更容易爆发水解，，
  ，DNA在相同的短时条件下相对稳固。。。。

因此，，
，可靠判断通常不是只做一个反应，，
，而是设置空缺、已知DNA比照和已知RNA比照，，
，再把未知样品的转变与比照较量。。。。若样品可能是混淆物，，
，还要把样品分成多个平行管，，
，划分举行处置惩罚。。。。

只需要快速定性时：用平行显色反应起源判断

若是实验目的只是区分一份教学样品或提取液的大致类型，，
，可以选择二苯胺反应和地衣酚反应。。。。操作时先将未知样品等量分装，，
，同时准备空缺管、已知DNA阳性比照和已知RNA阳性比照。。。。所有试管使用相同体积、相同反应时间和相同温度，，
，阻止把操作差别误以为样品差别。。。。

二苯胺反应：视察DNA倾向的蓝色转变

在经典酸性条件下，，
，DNA中的脱氧核糖经处置惩罚后可使二苯胺系统泛起蓝色或蓝绿色。。。。若未知样品的颜色强度和已知DNA比照靠近，，
，而空缺管基本稳固，，
，可判断样品含有DNA的可能性较高。。。。

需要注重，，
，颜色深浅不但由DNA决议，，
，还会受到样品浓度、加热时间、酸度和杂质影响。。。。颜色很浅不可直接等同于“没有DNA”，，
，尤其是样品量较少或核酸已经部分降解时，，
，应连系核酸酶处置惩罚或电泳再次确认。。。。

地衣酚反应：视察RNA倾向的绿色转变

地衣酚反应使用核糖在特定条件下形成反应产品，，
，RNA通常泛起绿色、蓝绿色或相近色调。。。。若未知样品与已知RNA比照泛起相似的颜色，，
，罢了知DNA比照反应显着较弱，，
，说明样品中保存RNA的可能性较高。。。。

该要领并非对RNA绝对专一，，
，其他含戊糖的物质、缓冲液因素和样品杂质都可能造成配景颜色。。。。因此，，
，地衣酚阳性只能作为“RNA倾向”的证据，，
，最好与RNase处置惩罚后的条带转变或碱水解效果配合使用。。。。

两种显色效果应怎样合并判断

显色实验的常生效果与处置惩罚建议

二苯胺反应	地衣酚反应	起源判断
显着阳性	较弱或阴性	更切合DNA样品特征
较弱或阴性	显着阳性	更切合RNA样品特征
均有显着反应	均有显着反应	可能含DNA和RNA，， ，也可能保存显色滋扰
均不显着	均不显着	浓度过低、反应失效或样品并非可检测核酸

样品可能混适时：用DNase和RNase分组处置惩罚

当提取物来自细胞、组织或微生物，，
，往往不可预先假定其中只有一种核酸。。。。这时，，
，分组酶切比纯粹显色更有诠释力。。。。建议至少设置四组：未经处置惩罚的样品、加入DNase的样品、加入RNase的样品，，
，以及加入与酶液条件相同但不含酶的比照组。。。。

1. 将统一份样品等量分装，，
   ，只管使各管初始浓度一致。。。。
2. 凭证所用DNase或RNase产品说明书加入反应系统，，
   ，坚持推荐的缓冲液、温度和时间。。。。
3. 反应竣事后，，
   ，对各组举行琼脂糖凝胶电泳，，
   ，或检测处置惩罚前后的核酸信号转变。。。。
4. 将酶处置惩罚组与未处置惩罚组、无酶比照组较量，，
   ，而不是只视察某一条泳道。。。。

若是DNase处置惩罚后主要条带显着削弱或消逝，，
，而RNase处置惩罚影响较小，，
，样品以DNA为主。。。。相反，，
，若是RNase处置惩罚造成主要信号下降，，
，说明样品以RNA为主。。。。若两种处置惩罚都只能消除一部分条带，，
，通常提醒样品中同时含有DNA和RNA，，
，或者保存酶切不完全、酶失活、盐离子不对适等实验因素。。。。

关于含RNA的样品，，
，电泳时要特殊关注降解问题。。。。RNA容易在操作历程中被核糖核酸酶破损，，
，可能体现为拖尾或弥散配景。。。。此时不可简朴把“条带不清晰”诠释为没有RNA，，
，应先检查样品生涯、用具处置惩罚和电泳系统是否适合RNA。。。。

需要使用稳固性差别时：做碱处置惩罚比照

RNA的2'-羟基使其在碱性条件下更容易爆发分子内水解，，
，而DNA缺少这一结构，，
，在相同的短时处置惩罚条件下通常更稳固。。。？
？？梢越粗贩治创χ贸头Ｗ楹图畲χ贸头Ｗ，，
，反应后用电泳或其他核酸检测方法较量完整性。。。。

若处置惩罚后原本的核酸信号显着断裂、削弱或转变为低分子片断，，
，而比照组转变较小，，
，效果更支持RNA保存。。。。若主要高分子条带仍能坚持，，
，则更切合DNA特征。。。。不过，，
，碱浓度、温度和时间必需由实验计划统一划定；；
；
；；处置惩罚过强会造成非目的转变，，
，处置惩罚过弱则可能看不出差别。。。。

只有电泳或分光光度计时，，
，应该怎样判断

电泳可以提供有价值的线索，，
，但不可仅凭条带位置完成DNA与RNA判别。。。。DNA常体现为较大的高分子条带或靠近加样孔的信号；；
；
；；真核细胞总RNA可能泛起较有纪律的核糖体RNA条带。。。？
？？墒，，
，样品是否降解、分子巨细、变性条件和凝胶系统都会改变外观，，
，纯化RNA也纷歧定泛起典范条带。。。。

A260可用于估算核酸浓度，，
，A260/A280可辅助判断卵白质污染，，
，但DNA和RNA在紫外区的吸收都很相近。。。。因此，，
，分光效果适合回覆“核酸约莫有几多”和“纯度是否合适”，，
，不适合单独回覆“这是DNA照旧RNA”。。。。

若是需要检测特定序列，，
，可将样品分成两条蹊径：DNA直接举行PCR，，
，RNA先逆转录天生cDNA，，
，再举行RT-PCR。。。。同时设置无逆转录比照，，
，用于判断扩增信号是否来自残留DNA。。。。这个要领既能判断模板类型，，
，也能回覆样品中是否含有目的序列，，
，但它依赖特异性引物，，
，不可替换对未知核酸的通用判别。。。。

按实验目的选择最合适的组合

• 课堂演示或少量样品：选择二苯胺反应、地衣酚反应，，
  ，并配合已知DNA和RNA比照。。。。
• 未知提取物或嫌疑混淆样品：优先接纳DNase、RNase平行处置惩罚，，
  ，再用电泳较量信号转变。。。。
• 想使用结构稳固性差别：增添碱处置惩罚组，，
  ，但必需坚持处置惩罚条件可比。。。。
• 需要确认特定基因或序列：接纳PCR与RT-PCR，，
  ，并设置无逆转录比照。。。。

涉及强酸、加热或有机显色试剂时，，
，应凭证实验室标准操作规程举行，，
，使用合适的防护和透风条件。。。。最终报告建议同时写明样品处置惩罚方法、比照设置、视察到的颜色或条带转变，，
，以及可能影响效果的因素。。。。这样获得的结论应表述为“支持DNA为主”“支持RNA为主”或“提醒两者并存”，，
，比仅凭一次显色直接下绝对结论更可靠。。。。

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