邱启明
宣布于 新京报
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判断一个样原来自哪种动物，，，，，通常不可只看颜色、气息或肉质。。。。。较可靠的做法是先确认样本类型和生涯状态，，，，，再决议接纳形态视察、显微特征、卵白检测照旧DNA检测。。。。。完整个体、骨骼、牙齿、毛发等样本可以先做外观和结构比对；；；；；肉块、血液、加工食物、碎屑或泉源不明的组织，，，，，通常应以物种特异性PCR或DNA条形码检测作为主要依据。。。。。若样本可能混淆了多种动物，，，，，则需要接纳混淆样天职析要领。。。。。
样本是什么状态，，，，，决议先看形状照旧先做检测？？
第一步不是马上提取DNA，，，，，而是纪录样本的泉源、形态、生涯时间和是否经由加工。。。。。这些信息会直接影响判断要领。。。。？？梢韵劝聪旅娴那樾尉傩衅鹪捶至。。。。。
差别样本类型的优先判断要领
| 样本状态 |
优先要领 |
适合获得的效果 |
主要限制 |
| 完整动物或较完整组织 |
形状、骨骼、牙齿、皮肤和附肢特征 |
先判断动物大类，，，，，部分情形下可到物种 |
幼体、损伤个体和近缘物种容易混淆 |
| 肉块、内脏、加工食物 |
DNA检测，，，，，须要时连系显微视察 |
确认是否属于候选动物 |
加热、腌制和混淆可能造成DNA降解 |
| 毛发、羽毛、骨骼、牙齿 |
结构视察加DNA检测 |
缩小规模或确认物种 |
根部缺失、陈腐或污染时提取难度较高 |
| 血液、渗透物、渗透物 |
DNA检测或专门的卵白检测 |
判断动物泉源 |
少量样本和情形污染会影响效果 |
| 多种组织混在一起 |
混淆样本DNA剖析 |
识别样本中可能包括的多个物种 |
差别物种含量差别会影响检出情形 |
若是样本仍然完整，，，，，形态视察可以作为快速筛查。。。。。例如，，，，，视察头骨比例、牙齿排列、蹄或爪的形状、毛发横截面、羽毛结构、鳞片排列以及骨骼毗连方法。。。。。若只是颜色、巨细、脂肪几多或肉的纹理相似，，，，，不应直接据此认定样本属于某种动物，，，，，由于这些特征会受到年岁、部位、饲养条件和加工方法影响。。。。。
已知可能是哪几种动物时，，，，，怎样最快完成判断？？
当目的已经缩小到几个候选工具，，，，，例如只需要区分猪、狗和其他几种动物，，，，，优先选择物种特异性PCR或实时荧光PCR。。。。。这种要领针对某一动物的特定DNA片断设计检测标记，，，，，效果通常体现为某个候选物种泛起扩增信号，，，，，而其他候选物种没有响应信号。。。。。
- 列出候选物种。。。。。不要只写“动物DNA”，，，，，而应明确需要区分的工具，，，，，例如猪、狗、牛、羊或鸡。。。。。
- 选择目的组织和检测标记。。。。。肌肉、血液、毛根和骨骼都可能提供DNA，，，，，但生涯状态差别，，，，，适合的标记长度也差别。。。。。
- 准备针对候选物种的检测系统。。。。。若是需要扫除多个物种，，，，，可划分检测；；；；；若是候选规模很窄，，，，，多重PCR可以同时视察多个目的。。。。。
- 设置比照。。。。。至少应有已知物种阳性比照、无模板比照和提取空缺比照，，，，，以区分真实信号、试剂污染和提取历程污染。。。。。
- 重复要害效果。。。。。特殊是样本量少、DNA浓度低或第一次效果与外观判断纷歧致时，，，，，应重新提取或用另一段DNA标记复核。。。。。
这种要领适合“只需要确认是否属于某个候选动物”的场景，，，，，速率和判断偏向都较量明确。。。。。但若是真正泉源完全未知，，，，，或者候选名单遗漏了现实物种，，，，，纯粹做几个物种特异性PCR可能获得“都不是”的效果，，，，，却不可说明样本究竟来自什么动物。。。。。
完全不知道泉源时，，，，，DNA条形码应该怎么用？？
泉源未知的简单动物样本，，，，，通？？梢越幽蒁NA条形码。。。。。它的基本思绪是从样本中扩增一段具有物种区分能力的DNA区域，，，，，再对序枚举行比对。。。。。动物样本常用线粒体中的COI、12S或16S等标记，，，，，但详细选摘要看动物种别、样实质量和近缘物种之间的差别。。。。。
现实操作可以按以下顺序举行：
- 取具有代表性的样本。。。。。只管从样本内部取材，，，，，阻止只取外貌可能附着的杂质。。。。。若样本很。。。。。，，，，应分装保存一部分用于复核。。。。。
- 提取DNA并检查质量。。。。。需要同时关注DNA是否提取乐成以及是否含有抑制扩增的因素。。。。。加工食物、土壤污染样本和陈腐组织尤其需要注重这一点。。。。。
- 扩增条形码区域。。。。。DNA生涯较好时可以使用较长片断；；；；；若样本降解严重，，，，，应改用更短的目的片断。。。。。
- 获得序列并举行比对。。。。。将检测序列与可靠的物种参考序列较量，，，，，视察是否在统一物种或统一近缘类群中稳固群集。。。。。
- 连系样本配景诠释。。。。。最相似的单条序列纷歧定即是最终物种结论，，，，，还要看参考数据库是否笼罩该类群、近缘物种是否能被该标记区分，，，，，以及序列质量是否足够。。。。。
DNA条形码适合回覆“这个样本更靠近哪种动物”或“是否属于某个物种”的问题。。。。。关于近缘物种，，，，，单个线粒体标记可能无法彻底区分，，，，，这时应增添另一种标记、接纳核DNA位点，，，，，或使用系统发育剖析举行复核。。。。。不要把任何一次比对中的“最高相似度”直接看成无条件的物种确认。。。。。
样本可能混有多种动物时，，，，，为什么不可只做一次PCR？？
若是样本由多种肉类、多个个体或差别泉源的组织混淆而成，，，，，简单PCR只能说明某个目的是否被检出，，，，，不可包管样本中只有这一种动物。。。。。此时应先判断问题是“是否含有某种动物”，，，，，照旧“样本中事实有哪些动物”。。。。。
若是只体贴几个指定物种，，，，，可以划分举行物种特异性PCR。。。。。若目的是尽可能找出未知混淆物中的多个物种，，，，，则可接纳DNA宏条形码或高通量测序，，，，，再凭证多个序列信号判断组成。。。。。需要注重的是，，，，，检测到的序列比例纷歧定即是现实组织比例，，，，，由于差别物种的DNA含量、扩增效率和组织泉源可能差别。。。。。
混淆样天职析尤其需要设置提取空缺和阴性比照，，，，，并只管从差别部位取样。。。。。若是只有一个部位泛起某种微弱信号，，，，，而其他重复样本均未泛起，，，，，应将其视为待复核效果，，，，，而不是连忙认定样本中保存该动物。。。。。
形态判断和DNA判断纷歧致时，，，，，效果该怎么处置惩罚？？
形态与DNA结论纷歧致时，，，，，先不要简朴选择其中一个。。。。。常见缘故原由包括样本被加工导致形状改变、外部残留造成DNA混入、目的片断扩增失败、参考数据库缺乏，，，，，或者样本自己含有多种动物因素。。。。。
可以按以下顺序复核：
- 重新确认样本标签、取样位置和生涯纪录，，，，，扫除样本混放。。。。。
- 检查DNA浓度、片断完整性和扩增比照，，，，，判断是否保存降解或抑制。。。。。
- 从样本的差别部位再次取材，，，，，较量效果是否一致。。。。。
- 换用另一种DNA标记，，，，，尤其是近缘物种或首次泛起的异常效果。。。。。
- 将检测效果与形状、样本配景和参考序列笼罩情形一起诠释。。。。。
若是最终只需要一个可靠的物种结论，，，，，较稳妥的判断标准是：样原泉源纪录清晰，，，，，检测比照正常，，，，，重复取样效果一致，，，，，并且至少有一个能区分目的物种的标记获得支持。。。。。若只能判断到“哺乳动物”“犬科”或“猪属”等层级，，，，，应如实保存该层级，，，，，不要为了获得详细物种名称而太过解读。。。。。
没有实验条件时，，，，，怎样做出有价值的起源判断？？
没有实验室条件时，，，，，可以先完成可复核的初筛，，，，，而不是仅凭直觉下结论。。。。。先拍摄样本整体和局部照片，，，，，标注长度、颜色、纹理、断面、毛发或骨骼结构，，，，，并纪录样本收罗时间、所在、生涯方法和是否经由烹煮、腌制、冷冻或其他加工。。。。。
完整动物或较完整骨骼可以凭证牙齿、足部、耳部、尾部、毛发和骨骼比例查找专业图鉴，，，，，再由具备分类履历的人举行比对。。。。。肉块、血迹、渗透物和加工食物则不适合仅靠肉眼判断。。。。。此时可以把外观视察效果作为候选规模，，，，，最终通过PCR、DNA条形码或经由验证的卵白检测确认。。。。。
简而言之，，，，，完整样本先做形态筛查，，，，，候选明确时做物种特异性PCR，，，，，泉源未知时做DNA条形码，，，，，混淆样本则接纳多物种剖析。。。。。要领应凭证样本状态和需要抵达的判断层级选择，，，，，这样才华从“可能是哪种动物”逐步获得可复核的物种结论。。。。。
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