人、狗和猪的DNA不可靠颜色、气息、黏稠度或通俗电泳条带直接判断。。。。要区分未知样本属于人、狗照旧猪，，，，通常需要先提取DNA，，，，再使用物种特异性PCR或实时荧光定量PCR检测；；；；若是样本因素重大或可能混淆，，，，则进一步对特定片断测序。。。。最适用的判断路径是：确认样实质量，，，，划分检测人、狗、猪的物种标记，，，，最后连系阴性、阳性和内参效果作出结论。。。。

一、先确定样本是否适合检测

取样部位会直接影响效果。。。。血液、口腔拭子、肌肉组织、唾液和带毛囊的毛发，，，，通常能够提供较好的核DNA。。。。只有毛干、脱落的皮屑或经由高温、强酸碱处置惩罚的质料，，，，可能只剩少量或较为破碎的DNA，，，，适合优先举行线粒体片断检测，，，，而纷歧定适合个体识别。。。。

取样时应使用一次性采样工具，，，，并划分密封、编号，，，，阻止差别样本之间交织污染。。。。正式检测前，，，，实验室一样平常会通过DNA浓度、纯度和片断完整性判断提取物是否能够进入后续PCR。。。。若没有扩增，，，，不可连忙认定样本“不属于人、狗或猪”，，，，也可能是DNA降解、抑制物残留或取样量缺乏。。。。

二、用物种特异性PCR区分三类DNA

若是目的只是判断未知样本属于哪一种动物，，，，最直接的要领是设计三组检测系统，，，，划分针对人、狗和猪的特异性序列。。。。常见靶区包括线粒体12S rRNA、16S rRNA、细胞色素b（cytb）、COI，，，，以及经由验证的物种特异性核基因片断。。。。每一组引物都应只对目的物种爆发稳固扩增，，，，同时只管不扩增另外两种DNA。。。。

1. 提取总DNA：从样本中提取可能保存的所有DNA，，，，而不是先假定样原泉源。。。。
2. 设置人、狗、猪三组反应：未知DNA划分加入三套物种特异性引物系统。。。。条件允许时，，，，可接纳三重或多重PCR，，，，但单独检测通常更容易排查交织反应。。。。
3. 加入扩增比照：使用已知的人、狗、猪DNA作为阳性比照，，，，同时设置无模板阴性比照和样本内参。。。。这样可以区分“目的物种阴性”和“整次反应失败”。。。。
4. 视察扩增效果：通俗PCR可通过电泳视察目的巨细的条带；；；；实时PCR则通过荧光曲线和Ct值判断是否爆发特异扩增。。。。

例如，，，，人标记扩增阳性、狗标记和猪标记均为阴性，，，，且内参正常，，，，可支持“样本含有人源DNA”的判断。。。。若猪标记阳性而人、狗标记阴性，，，，则支持猪源。。。。若人和猪两个标记同时阳性，，，，则不可简朴归为某一个物种，，，，需思量混淆样本、交织污染或引物非特异扩增，，，，并举行复核。。。。

三、怎样看懂PCR和电泳效果

通俗琼脂糖凝胶只能显示是否保存某个巨细的DNA片断，，，，不可仅凭条带位置证实物种身份。。。。纵然条带巨细切合预期，，，，也应连系阳性比照、阴性比照和引物特异性判断。。。。实时PCR中的Ct值可以反应相对扩增情形，，，，但Ct值自己不是物种名称，，，，仍需看对应的检测系统是否经由验证。。。。

四、需要更可靠确认时举行测序

当样本量少、泉源不明、泛起多条带，，，，或者人、狗、猪标记同时泛起阳性时，，，，可以接纳目的条带并举行Sanger测序，，，，再将所得序列与经由审核的物种数据库举行比对。。。。若序列与猪的线粒体或核基因参考序列高度一致，，，，而与人、狗序列保存明确差别，，，，就能为猪源判断提供更直接的证据。。。。

测序特殊适合解决“PCR有条带但无法确定是否为特异条带”的问题。。。。不过，，，，线粒体片断通常适合物种判断，，，，不适合直接证实某个详细个体。。。。若要举行人体个体识别，，，，应检测人STR位点；；；；若要举行犬只个体识别，，，，则应接纳适用于犬的STR或SNP标记。。。。物种判断和个体判断是两个差别层级的效果，，，，不可混为一谈。。。。

五、混淆样本应接纳分层判断

若是统一样本中同时含有人、狗和猪的DNA，，，，简单PCR效果只能说明某个物种的遗传物质保存，，，，不可说明各自所占比例，，，，也不可据此判断样原来自哪个主体。。。。此时可先用三套物种特异性qPCR划分确认物种，，，，再凭证检测目的选择混淆DNA剖析、扩增子测序或更高通量测序。。。。

若检测的是食物、组织或情形残留，，，，通常做到“是否含有人、狗或猪源DNA”即可；；；；若涉及泉源追踪、亲缘关系或司法用途，，，，则需要生涯原始样本、检测纪录和比照效果，，，，并由具备响应资质的实验室完成复核。。。。最轻盈的适用计划是：先做内参确认DNA有用，，，，再划分举行人、狗、猪特异性PCR，，，，泛起阳性重叠时用自力靶标或测序确认。。。。